HPLC 液相色譜柱如何選購？
更新時間：2025-06-25 點擊次數(shù)：140
- 考慮分析物的性質(zhì)：
- 化學結(jié)構(gòu)：極性強的化合物在反相色譜柱上保留弱，含芳香環(huán)的化合物，使用苯基 / 苯乙基固定相可能效果更好。
- 穩(wěn)定性：了解分析物對 pH、溫度的敏感程度，避免選擇在不適宜條件下不穩(wěn)定的色譜柱。
- 分子量范圍：小分子通常使用 80-120Å 孔徑的色譜柱；多肽適合 120-200Å 孔徑；蛋白質(zhì)等大分子則需要≥300Å 孔徑的色譜柱。
- 選擇固定相：
- 鍵合相類型：反相色譜中，C18 柱通用性強；C8 柱疏水性稍弱；苯基 / 苯乙基柱對含芳香環(huán)化合物有獨特選擇性。正相色譜適用于極性化合物和異構(gòu)體分離。親水作用色譜用于強極性、親水性化合物。離子交換色譜適用于帶電荷化合物。尺寸排阻色譜依據(jù)分子大小分離，常用于測定蛋白質(zhì)、聚合物的分子量分布。
- 鍵合相密度：高密度覆蓋的鍵合相可減少硅醇基效應(yīng)，使分析結(jié)果更穩(wěn)定。
- 封端：封端處理可減少殘余硅醇基與堿性化合物的次級相互作用，改善峰形。
- 確定色譜柱尺寸：
- 柱長：較長的色譜柱分離度更高，但分析時間長、柱壓高；短柱則相反?？焖俜治龀Ｓ?50-100mm 的短柱；復雜樣品分離用 150-250mm 的長柱。
- 內(nèi)徑：4.6mm 內(nèi)徑的色譜柱通用性好；1.0mm 或更小內(nèi)徑的微徑柱常用于質(zhì)譜聯(lián)用；內(nèi)徑大于 4.6mm 的半制備 / 制備柱適用于樣品制備分離。
- 考慮硅膠基質(zhì)：
- 純度：高純度硅膠金屬雜質(zhì)含量低，能有效改善峰形和穩(wěn)定性；低純度硅膠成本低，但可能影響結(jié)果準確性和重復性。
- pH 耐受范圍：常規(guī)硅膠柱在 pH2-8 范圍內(nèi)使用，雜化顆粒技術(shù)柱 pH 耐受范圍可拓寬至 1-12。
- 溫度耐受性：常規(guī)硅膠柱通常耐受溫度低于 60°C，雜化顆?；蛱厥怄I合柱可耐受更高溫度。
- 其他因素：
- 流動相條件：確保色譜柱能耐受流動相的 pH，且流動相中的緩沖鹽、添加劑與固定相兼容。
- 儀器系統(tǒng)：根據(jù)儀器的耐壓能力選擇合適的色譜柱，UHPLC 柱需要超高壓系統(tǒng)，常規(guī) HPLC 柱在普通 HPLC 系統(tǒng)上即可使用。
- 應(yīng)用要求：根據(jù)分離度、分析速度、靈敏度、穩(wěn)定性等應(yīng)用要求選擇色譜柱。同時，也要考慮成本因素，在性能和預算之間找到平衡。
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